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ELISA所需的对照样品总结
做ELISA实验需要哪些对照样品？相信还有很多小伙伴不是很清楚，今天恒远小编就给大家总结一下，ELISA所需的对照样品都有哪些吧。
1.阳性对照
可使用已知含有目标蛋白的内源性可溶样品，或已知含有检测抗体免疫原的纯化蛋白或多肽来作为阳性对照。当样品的检测结果为阴性时，阳性对照的阳性结果可表明实验过程无误且有效，所以实验的阴性结果是真实的。
2.阴性对照
阴性对照指的是已知不表达目标蛋白的样品。其有助于检测非特异性结合和假阳性结果。为验证结果，您使用的每个微孔板均应包含一份阴性对照样品。
3.标准品
标准品是一种含有已知浓度的目标蛋白的样品，可从中获得标准曲线。例如，以下是我们的小鼠 IL-6 ELISA 试剂盒的典型标准曲线，浓度范围为 15.6 至 500 pg/mL。标准曲线不佳意味着抗体未正确结合或未捕获蛋白标准品。趋势线的 R2 值应 > 0.99。
4.样本基质（加标对照品）对照中的标准品
在 ELISA 中检测血清样品时，按照惯例标准品用正常稀释缓冲液来稀释。但我们建议您同时用检测的种属血清来稀释标准品。然后可以将两者进行比较，以确保血清中的其他蛋白质对标准曲线没有影响。这就是所谓的加标对照，并可表明目标蛋白在加入基质后的回收率?？山邮艿慕峁?80%-120%。
5.内源性阳性对照
如果您正在检测重组蛋白样品，我们建议您纳入内源性阳性对照。这应该是您实验的一个必要部分。重组蛋白的抗体检测存在一些固有的困难，需要考虑到重组蛋白的折叠可能与内源性天然蛋白的结构不同，并可能阻止抗体结合表位。标签蛋白的情况尤其如此，所以建议确保标签位于重组蛋白的N端或C端。
最重要的是，务必确保重组蛋白中包括您所使用的抗体的免疫原序列。内源性阳性对照对验证实验结果，以及说明试剂（例如抗体）和实验过程的有效性，起到重要作用。
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