生化试剂盒
- α-淀粉酶试剂盒-可见分光光度法
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测定原理：
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在70℃钝化15min，从而测定α-淀粉酶活性。
| 中文名称 |
α-淀粉酶试剂盒 |
| 规格 | 24样 |
| 货号 |
E-363-SH
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| 价格 | ￥230 |
| 样本类型 | 血清，血浆，组织匀浆，细胞裂解液、细胞培养上清液等 |
| 检测范围 | 详见说明书 |
| 检测方法 |
可见分光光度法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 咨询我司业务员获取 |
| 文献 |
咨询我司业务员获取 |
注 意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
测定原理：
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在70℃钝化15min，从而测定α-淀粉酶活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：25mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需90℃加热溶解后再用；
试剂二：20mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需70℃加热溶解后再用。
粗酶液提取：
组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加1 mL蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
血清（浆）：直接检测。
操作步骤和加样表（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。
2、 试剂一或试剂二40℃预热10min
3、测定步骤
|
试剂（μL） |
对照管 |
测定管 |
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α 淀粉酶原液 |
250 |
250 |
70℃水浴15min左右，冷却
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蒸馏水 |
250 |
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试剂二 |
|
250 |
在40℃恒温水浴中准确保温5min
|
试剂一 |
500 |
500 |
混匀，95℃水浴5min，冷却， 540nm处读取对照管和测定管吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。
α-淀粉酶活性计算：
1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778； x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、α 淀粉酶活性
（1）按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(ΔA＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷（V样×Cpr）÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（浆）样本中α 淀粉酶活性计算
单位定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)
V反总：反应体系总体积，0.5mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。
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